IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactoside) ke analoge ea substrate ea β-galactosidase, e leng ntho e ka kenngoang habonolo haholo. Tlas'a tlhahiso ea IPTG, ntho e ka etsang hore protheine e be e rarahaneng ka protheine e hatellang e ka fetoloa, e le hore e se ke ea kopanngoa le gene e reretsoeng, 'me gene e reretsoeng e hlahisoe ka katleho. Joale mahloriso a IPTG a lokela ho fumanoa joang nakong ea teko? Na e kholoanyane e molemo?
Taba ea pele, ha re utloisiseng molao-motheo oa tlhahiso ea IPTG: Lactose operon (element) ea E. coli e na le liphatsa tsa lefutso tse tharo tsa sebopeho, Z, Y, le A, tse kenyang β-galactosidase, permease, le acetyltransferase, ka ho latellana. lacZ e haeterolizetsa lactose ho glucose le galactose, kapa ho allo-lactose; lacY e lumella lactose tikolohong ho feta ka har'a lera la sele 'me e kene ka seleng; lacA e fetisetsa sehlopha sa acetyl ho tloha acetyl-CoA ho ea ho β-galactoside, e leng se kenyeletsang ho tlosa phello e chefo. Ho phaella moo, ho na le tatellano ea ts'ebetso O, tatellano ea ho qala P le liphatsa tsa lefutso tse laolang I. Khoutu ea liphatsa tsa lefutso tsa I ke protheine e hatellang e ka tlamang sebakeng sa O sa tatellano ea opereishene, e le hore operon (meta) e hatelloe le ho tima. Hape ho na le sebaka sa ho tlama bakeng sa sebaka sa ho tlama sa catabolic gene activator protein-CAP holimo ho tatellano ea ho qala ea P. Lenaneo la P, tatellano ea O le sebaka sa ho tlama sa CAP hammoho li etsa sebaka sa taolo sa lac operon. Lijini tsa khouto tsa li-enzyme tse tharo li laoloa ke sebaka se le seng sa taolo ho fihlela tlhahiso e hokahaneng ea lihlahisoa tsa liphatsa tsa lefutso.
Ha ho se na lactose, lac operon (meta) e boemong ba kgatello. Nakong ena, lac repressor e hlahiswang ke tatellano ya I tlasa taolo ya tatellano ya promoter ya PI e tlama ho tatellano ya O, e thibelang RNA polymerase ho tlama ho tatellano ya P mme e thibela ho qalwa ha phetolelo; ha lactose e le teng, lac operon (meta) e ka hlohlelletswa Tsamaisong ena ya operon (meta), ntho e susumetsang ya nnete ha se lactose ka boyona. Lactose e kena sele mme e susumetswa ke β-galactosidase hore e fetolwe ho ba allolactose. Ya morao, e le molek'hule e susumetsang, e tlama ho protheine e hatellang mme e fetola sebopeho sa protheine, e leng se lebisang ho arohaneng ha protheine e hatellang ho tloha tatellanong ya O le phetolelo. Isopropylthiogalactoside (IPTG) e na le phello e tshwanang le allolactose. Ke ntho e susumetsang e matla haholo, e sa sisinyeheng ke dibaktheria mme e tsitsitse haholo, kahoo e sebediswa haholo dilaboratoring.
Mokhoa oa ho fumana hore na IPTG e na le mahloriso a makae? Nka mohlala oa E. coli.
Mofuta wa E. coli BL21 o entsweng ka dijini o nang le pGEX (CGRP/msCT) e positive recombinant o ile wa entwa ka hara mokelikeli wa LB o nang le 50μg·mL-1 Amp, mme wa hodiswa bosiu bohle mochesong wa 37°C. Mokelikeli o ka hodimo o ile wa entwa ka hara dibotlolo tse 10 tsa mokelikeli wa LB o foreshe wa 50mL o nang le 50μg·mL-1 Amp ka karolelano ya 1:100 bakeng sa mokelikeli wa katoloso, mme ha boleng ba OD600 e ne e le 0.6~0.8, IPTG e ile ya eketswa ho ya ho mahloriso a ho qetela. Ke 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0mmol·L-1. Kamora ho kenngoa ka mocheso o tšoanang le ka nako e tšoanang, 1 mL ea tharollo ea baktheria e ile ea ntšoa ho eona, 'me lisele tsa baktheria li ile tsa bokelloa ka ho centrifugation 'me tsa kenngoa SDS-PAGE ho sekaseka tšusumetso ea mahloriso a fapaneng a IPTG tlhahisong ea protheine, ebe li khetha mahloriso a IPTG a nang le ponahalo e kholo ka ho fetisisa ea protheine.
Kamora liteko, ho tla fumanoa hore mahloriso a IPTG ha a maholo kamoo ho ka khonehang. Lebaka ke hobane IPTG e na le chefo e itseng ho libaktheria. Ho feta mahloriso ho tla boela ho bolaee sele; 'me ka kakaretso, re tšepa hore protheine e qhibilihang haholoanyane e hlahisoang ka seleng, e molemo, empa maemong a mangata ha mahloriso a IPTG a le holimo haholo, ho tla thehoa palo e kholo ea ho kenyelletsoa. 'Mele, empa palo ea protheine e qhibilihang e fokotsehile. Ka hona, mahloriso a IPTG a loketseng ka ho fetisisa hangata ha a maholo a betere, empa mahloriso a tlaase a ba tlaase.
Morero oa ho kenya le ho lema mefuta e entsoeng ka liphatsa tsa lefutso ke ho eketsa chai ea protheine e reretsoeng le ho fokotsa litšenyehelo. Tlhaloso ea liphatsa tsa lefutso tse reretsoeng ha e amehe feela ke lintlha tsa mofuta ona le polelo ea plasmid, empa hape le maemo a mang a kantle, joalo ka mahloriso a ntho e susumetsang, mocheso oa tlhahiso le nako ea tlhahiso. Ka hona, ka kakaretso, pele protheine e sa tsejoeng e hlahisoa le ho hloekisoa, ho molemo ho ithuta nako ea tlhahiso, mocheso le mahloriso a IPTG e le ho khetha maemo a loketseng le ho fumana liphetho tse ntle ka ho fetisisa tsa liteko.
Nako ea poso: Tshitwe-31-2021